收藏！样本采集指南

看文献！看文献！做实验！还有…实验失败重新做实验！

也是Real令人心疼了。大家天天看文献，做实验，再看文献，做实验，有时候可能忽略了最最基础的步骤---采样。样本是后续一切的基础，样本都没取好，实验结果怎么能好呢？

超贴心的小编这里整理了取样方法给大家参考。

取样基本原则

组织量：100mg

具体取样步骤：

1. 准备好冻存管，用油性记号笔在管壁标清楚样本信息;
2. 准确切取所需部位的组织，最好切为细长薄块;
3. 在RNase-free的0.9%生理盐水中迅速漂洗样品，以去除血渍和污物;
4. 迅速放入冻存管，旋上盖子，迅速投入液氮冷冻15min以上;（或者迅速将组织完全浸入组织保存液中）
5. 将冻存管装入样品袋，标记清晰;
6.  将样品袋转移到干冰或-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

细胞量：1X10^6个

参考取样步骤：

1. 可用刮棒刮取或胰酶消化，离心收集细胞；
2. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
3. 直接抽提DNA或转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

细胞量：1X10^6个

参考取样步骤：

1. 贴壁细胞培养或处理结束后，去除培养液；
2. 按每10cm^2培养面积加1mL TRIZOL试剂的比例加入TRIZOL试剂；
3. 用1mL枪头反复吹打，使TRIZOL接触所有长有细胞的培养瓶表面以进行充分消化；
4. 转移到RNase-free的EP管中反复吹打细胞直至看不见成团的细胞块，整个溶液应该为清亮而不粘稠的状态；
5. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
6. 转移至干冰或-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

细胞量：1X10^6个

参考取样步骤：

1. 悬浮细胞培养或处理结束后，离心（1500g,4℃离心10min）去除培养液；
2. 将保留的细胞用PBS缓冲液快速洗一次，离心除去PBS缓冲液，收集细胞；
3. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
4. 直接抽提DNA或转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

细胞量：1X10^6个

参考取样步骤：

1. 悬浮细胞培养或处理结束后，离心（1500g,4℃离心10min）去除培养液；
2. 保留的细胞用PBS缓冲液快速洗一次，离心除去PBS缓冲液；
3. 按照每10^6个细胞加1mLTRIZOL的比例加入TRIZOL试剂，反复吹打细胞直至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮而不粘稠的状态；
4. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
5. 转移至干冰或-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

全血量：2mL

参考取样步骤：

1. 用（非肝素钠）抗凝管采取血液样本；
2. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
3. 转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

全血量：2mL

参考取样方法1：

1. 提前准备3倍体积的TRIZOL LS （Invitrogen）；
2. 用（非肝素钠）抗凝管采集血液样本；
3. 将抗凝血加至TRIZOL LS（裂解液）中，迅速立即摇匀；
4. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
5. 裂解液室温均匀裂解10min后，转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

参考取样方法2（✨推荐）：

1. 采用PAXgene Blood RNA Tube 采集全血；
2. 采集血液后，立即上下颠倒10次以上混匀；
3. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
4. 室温放置至少2小时后，转移至4℃或-20℃过夜放置。足量干冰寄送。

样本量：1mL

参考取样步骤：

1. 用（非肝素钠抗凝的）真空采血管采集血液样本，2小时内进行血浆分离；
2. 3000rpm/min，室温离心10min，收集上清至1.5mL/2mLEP管；
3. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
4. 转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

样本量：1mL

参考取样步骤：

1. 用（非肝素钠抗凝的）真空采血管采集血液样本，2小时内进行血浆分离；
2. 3000rpm/min，离心10min，收集上清，0.2mL/管分装至1.5mL/2mLEP管；
3. 加入3倍体积的TRIZOL（裂解液），立即用力摇匀；
4. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
5. 裂解液均匀裂解10min后，转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

样本量：1mL

参考取样步骤：

1. 用离心管（不抗凝）采集血液样本，37℃（或室温）静置1小时凝固分层；
2. 3000rpm/min，离心10min，收集上清，分装至1.5mL/2mLEP管；
3. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
4. 转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

样本量：1mL

参考取样步骤：

1. 用（ 不需要抗凝的）真空采血管采集血液样本，尽快进行血清分离；
2. 3000rpm/min，离心10min，收集上清，0.2mL/管分装至1.5mL/2mLEP管；
3. 加入3倍体积的TRIZOL（裂解液），立即用力摇匀；
4. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
5. 裂解液室温均匀裂解10min后，转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

样本量：4mL血浆/血清、20mL细胞上清分离得到的外泌体

参考取样步骤1（交由我司分离外泌体）：

1. 收集待分离外泌体的血清/血浆，体液或细胞培养液；
2. 3000rpm/min，离心10min，去除样品中的杂质等物质；
3. 吸取上清，使用油性记号笔标记清楚样本信息；
4. 转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

参考取样步骤2（客户自行分离外泌体）

1. 按照自己摸索的方法进行外泌体分离；
2. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
3. 转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

样本量：4mL血浆/血清、20mL细胞上清分离得到的外泌体

参考取样步骤1（交由我司分离外泌体）：

1. 收集待分离外泌体的血清/血浆，体液或细胞培养液3000rpm/min，离心10min，去除样品中的杂质等物质；
2. 吸取上清，使用油性记号笔标记清楚样本信息；
3. 转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

参考取样步骤2（客户自行分离外泌体）

1. 按照自己摸索的方法进行外泌体分离；
2. 向外泌体沉淀中加入少量PBS（<500μl）,混匀；
3. 加至装有5倍TRIZOL（裂解液）的管中，立即用力摇匀；
4. 使用油性记号笔标记清楚样本信息；
5. 裂解液室温均匀裂解10min后，转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。

备注：外泌体样本如需进行NTA检测，分离后加PBS（高纯度）重悬，直接寄送即可（不需加裂解液）。

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