临床研究

一文带你了解外泌体研究

摘要: 外泌体(exosomes)是直径为40-100nm的膜囊泡,起源于细胞内吞过程中形成的内体,最后再从细胞中释放到胞外。
 
外泌体(exosomes)是直径为40-100nm的膜囊泡,起源于细胞内吞过程中形成的内体,最后再从细胞中释放到胞外。
图注:外泌体的形成过程
 
外泌体最早发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中,后来发现越来越多体液中发现了外泌体的存在,比如唾液、乳汁、羊水、血清/血浆、尿液等。
外泌体中包裹了非常丰富的生物分子,如蛋白质、核酸(miRNA、mRNA、lncRNA、circRNA、DNA等)、脂类等。这些内容物赋予了外泌体多种多样的生物学功能,如细胞间的信息传递、调节免疫反应。
图注:外泌体的调控机制
此外,源于母细胞的外泌体还反映了疾病的信息,非常适合作为Biomarker为临床检测服务。
 
研究案例
文章题目:MicroRNA-Containing T-Regulatory-Cell-Derived Exosomes Suppress Pathogenic T Helper 1 Cells. 
PMID: 25035954      影响因子: 24.082    样本数据:GSE60615 
摘要:各种不同的免疫细胞都能分泌出特有的外泌体,本文通过研究Treg(T regulatory cell)细胞分泌的外泌体对Th1等其他免疫细胞的非接触影响,来解释Treg细胞在抑制炎症反应过程中的调控机制。
检测方法:
Affymetrix Mouse Genome 430 2.0 Array 表达谱芯片检测
Affymetrix Multispecies miRNA 3.0 Array miRNA芯片检测
实验分组情况:
1、以Treg细胞及其分泌的外泌体为研究对象
2、共培养实验
 
研究思路:
1、 明确Treg细胞能分泌外泌体;
2、 分析外泌体中miRNA和mRNA的成分,以及与母细胞(Treg细胞)之间的差别;
3、 通过共聚焦的方法证实Treg细胞中的miRNA/mRNA能通过外泌体的方式转移至T效应细胞;
4、 通过与T细胞共培养试验,验证Treg细胞中的miRNA能转移至T细胞中,并发挥作用;同时通过芯片检测,筛选其关键作用的miRNA,以及受体细胞的靶基因。
数据复用:
将这篇文献所包含的miRNA/mRNA检测数据(GSE60615)发送到GCBI在线分析实验室,设计如下分析方案,再现文章的结果,并对数据进行重新利用,看看你能否从分析结果中找到新的研究点?
Treg和外泌体差异miRNA及mRNA比较,证实外泌体携带了源细胞的部分信息,而且与源细胞存在区别。这些外泌体中的miRNA将成为研究的主角,充分展示外泌体在炎症反应中重要角色。
差异miRNA聚类结果图
T细胞中的Dicer基因被敲除后,无法形成成熟的miRNA,用该细胞系模型可以很方便模拟外泌体将miRNA和mRNA释放到靶细胞的过程。
通过比较与Treg细胞共培养的Dicer-/-T细胞和单独培养的Dicer-/-T细胞之间的区别,可以很清楚的探寻哪些miRNA从外泌体进入到T细胞,以及哪些基因受到了这些“外源”miRNA的影响。
miRNA-mRNA调控网络图
想要查看本方案完整分析结果
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本文由 GCBI学院 作者:乞嘚咙咚呛咚呛 发表,转载请注明来源!

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