作者：王刚（华东理工大学 肿瘤耐药和表观遗传）
文章题目：Copy Number Gain of hsa-miR-569 at 3q26.2 Leads to Loss of TP53INP1and Aggressiveness of Epithelial Cancers
DNA拷贝数在肿瘤细胞中的增多会导致肿瘤的发生，尽管一些DNA拷贝数的增加在染色体的一个很少的范围内，并且只能改变少量的基因，例如3q26.2位置的扩增，大约发生在35%高度恶性的卵巢癌和15%的乳腺癌中。试验证明3q26.2的扩增可以增加Mir569的表达水平，从而降低TP53INP1的表达量，进一步在体外和体内试验促进肿瘤细胞的增值和转移。因此miR569和靶基因TP53INP1有希望成为肿瘤标志物和治疗的靶点。
1、3q26.2的扩增和miR569的过表达存在直接的联系
通过分析TCGA中533例高侵袭的上皮样卵巢癌样本，发现在3q26.2的拷贝数增加(图1)，并且在该拷贝数增加的区域存在一个miR569(图2)。心得：通过分析公共数据库发现拷贝数增加的区域，检测该区域热点基因是一个不错的课题设计思路。
Qpcr进一步在3q26.2的拷贝数增加的细胞系中，miR569的表达量是增高的(图3)。在低表达miR569的细胞系中过表达miR569可以看到，MCF10A和IOS-80细胞系的增值能力和克隆形成能力增强(图4)。心得：过表达miR后，细胞功能学有改变，才可以接下来去寻找机制。
2、TP53INP1作为miR569的直接作用靶点
作者通过TargetScan和AGO-CLIP数据库，去预测miR569结合的靶点(图5)，发现两者共同结合的基因存在17个，并且过表达miR569后，17个候选结合靶点基因中，只有TP53INP1的表达量降低(图6)。心得：通过两个预测软件结合保证预测的作用靶基因的一致性，有利于选择的候选基因数目减少，过表达miR569后，检测候选靶基因的表达水平存在一致性，就可以说明该靶基因受到miR569调控。在MCF10A和IOS-1细胞系中过表达miR569后， TP53INP1蛋白的表达量降低；在HEYA8和OVCAR5中干扰miR569，TP53INP1蛋白的表达量更高(图7)。
3、 miR569通过抑制TP53INP1促进肿瘤的生长和增值
在乳腺癌和卵巢癌细胞系中q26.2的扩增和miR569的过表达与TP53INP1的表达量是相反的(图8)，荧光素酶报告基因实验证明TP53INP1的3UTR和miR569存在结合(图9)。MCF10A过表达miR569，干性基因：CD44、CD133、VIM的表达量上升，并且克隆形成能力明显增强(图10)。
4、TP53INP1的表达受到P53、P73和NF-KB的调控
在卵巢癌细胞系HEYA8和OVCAR5细胞系中分别转染sictl和si NF-KB，siP53，siP73后，48小时后TP53INP1的表达量明显下降，同时过表达miR569后，TP53INP1的蛋白水平进一步降低(图11)。过表达miR569后，MCF10A和IOSE-80对化疗药物顺铂的敏感性增强(图12)，干扰miR569后，MCF10A和IOSE-80在存在化疗药物顺铂时克隆形成能力明显降低(图13)，WB检测表明PUMA、CASP-3蛋白水平升高(图14)。
5、在原位的卵巢癌模型中抑制miR569可以降低肿瘤的生长和转移
在原位移植的卵巢癌模型中，干扰miR569以及加入化疗药物后，可以观察到肿瘤的大小和重量降低(图15)，并且TP53INP1的mRNA表达量上升(图16)。Ki67细胞数目减少，凋亡细胞数据增多，CD31的阳性细胞减少；TP53INP1和miR569与卵巢癌的生存存在明显的联系(图17)。
本文由 GCBI学院 作者：其明技术专家 发表，转载请注明来源！
